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DNA-Nachweis

DNA kann entweder durch die Fluoreszenz der gebun-

denen Ethidiumbromid oder durch Autoradiographie

von radioaktiv markierten DNA nachgewiesen werden.

Ethidiumbromid (0,5 µg/ml) kann auf Laufpuffer, um

Fortschritt zu überwachen Probe hinzugefügt werden,

weil der Farbstoff der Fluoreszenz unter einer UV-

Lampe offenbart Band Lage. (Um die Fortschritte zu

überprüfen, schalten Sie die Stromversorgung und

entfernen Sie den Deckel des Agarose-Einheit. Halten

Sie einen tragbaren UV-Lampe in der Nähe des laufen-

den Fach. Setzen Sie den Deckel und schalten Sie das

Gerät wieder auf Elektrophorese wieder aufzunehmen.)

Alternativ kann nach Elektrophorese, färben Sie das

Gel in einer Ethidiumbromid-Lösung (0,5 µg/ml H

für 15 bis 60 Minuten und dann sehen oder fotograﬁe-

ren Sie die Probe auf einem UV-Transilluminator.

Um das Gel zu fotograﬁeren, entweder stellen die

laufende Tablett auf dem Transilluminator Oberﬂäche

oder schieben Sie das Gel auf die Oberﬂäche für

maximale Belichtung. (Die Laufzeit beträgt 95% Tray

transparent für 302-nm-Licht und 40% transparent

und 254 nm-Licht.) Sehen Sie sich die Probe unter

366-nm-UV-Licht oder verringerter Intensität 302-nm

UV-Licht zu photonicking reduzieren.

Um die Hintergrundﬂuoreszenz von ungebundenem

Ethidiumbromid zu reduzieren, kann das Gel durch

Eintauchen für 5 Minuten in 0,01 m MgCl

, oder für

1 Stunde in 0,001 M MgSO

entfärbt werden. Ent-

färbung macht es leichter, kleine Mengen (weniger

als 10 ng) DNA nachzuweisen. (Sambrook, Abschnitt

6.15).

Bibliographie

Ausubel, et al., (eds). Current Protocols in Molecular

Biology. Greene Publishing and Wiley-Interscience.

New York (1993).

Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T., Molecu-

lar Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Har-

bor Laboratory Press (1989).

Achtung! Ethidiumbromid ist

ein Mutagen bekannt. Tragen

Sie immer Handschuhe beim

Umgang.

Achtung! UV-Schutzbrille

tragen und schützen die Haut

bei der Anwendung eines

UV-Lichtquelle.

Hinweis: Ethidiumbromid

verlangsamt DNA-Migration von

rund 15%.

Hinweis: Minimieren Sie

die Färbung Zeit, um kleine

Nukleinsäure-Fragmente aus

Diffusion aus dem Gel zu

verhindern.

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