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ADN detección

ADN puede ser detectada por la ﬂuorescencia de

bromuro de etidio consolidado o por autorradiografía

de ADN marcado radiactivamente.

El bromuro de etidio (0,5 µg/ml) se puede añadir a la

ejecución de tampón para controlar el progreso de la

muestra debido a la ﬂuorescencia del colorante en vir-

tud de una lámpara UV revela ubicación banda. (Para

comprobar el progreso, apague la fuente de alimen-

tación y retire la tapa de la unidad de agarosa. Man-

tenga un portátil lámpara UV cerca de la bandeja en

funcionamiento. Vuelva a colocar la tapa y encienda la

alimentación de nuevo para reanudar la electroforesis.)

Alternativamente, después de la electroforesis, el

gel mancha en una solución de bromuro de etidio

(0,5 µg/ml H

O) durante 15 a 60 minutos y luego ver

o fotograﬁar la muestra sobre un transiluminador UV.

Para fotograﬁar el gel, ya sea colocar la bandeja que

se ejecuta en la superﬁcie transiluminador o desli-

ce el gel sobre la superﬁcie de exposición máxima.

(La bandeja de ejecución es del 95% transparente

a 302 nm de luz y un 40% transparente a la luz

de 254 nm.) Ver la muestra a la luz ultravioleta de

366 nm o menor intensidad 302-nm de luz UV para

reducir photonicking.

Para reducir la ﬂuorescencia de fondo de bromuro de

etidio no unido, el gel puede ser destained por remojo

durante 5 minutos en 0,01 m MgCl

, o durante 1

hora en 0,001 M MgSO

. Decolorante hace que sea

más fácil de detectar pequeñas cantidades (menos de

10 ng) de ADN. (Sambrook, sección 6.15).

Bibliografía

Ausubel, et al., (eds). Current Protocols in Molecular

Biology. Greene Publishing and Wiley-Interscience.

New York (1993).

Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T., Molecu-

lar Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Har-

bor Laboratory Press (1989).

¡Atención! El bromuro de etidio

es un mutágeno conocido.

Siempre use guantes al

manipular.

¡Atención! Use gafas de

seguridad UV y proteger la piel

cuando se utiliza cualquier

fuente de luz UV.

Nota: El bromuro de etidio

frena la migración del ADN en

un 15%.

Nota: Reducir al mínimo el

tiempo de tinción para evitar

pequeños fragmentos de ácido

nucleico de fuera de difusión

del gel.

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